1 适用范围
本标准规定了测定水中五日生化需氧量(BOD5）的稀释与接种的方法。
本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。
方法的检出限为0.5 mg/L，方法的测定下限为2 mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为 6 mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6 000 mg/L。
2 规范性引用文件
本标准内容引用了下列文件中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 7489 水质 溶解氧的测定 碘量法
GB/T 11913 水质 溶解氧的测定 电化学探头法
HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范
3 方法原理
生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在(20±1)℃的暗处培养5d士4h或(2+5) d±4h[先在0-4℃的暗处培养2d，接着在(20土1)℃的暗处培养5d，即培养 (2+5) d]，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD5形式表示。
若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6 mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。
4 试剂和材料
本标准所用试剂除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。
4.1 水：实验用水为符合GB/T 6682规定的3级蒸馏水，且水中铜离子的质量浓度不大于0.01 mg/L, 不含有氯或氯胺等物质。
4.2 接种液：可购买接种微生物用的接种物质，接种液的配制和使用按说明书的要求操作。也可按以下方法获得接种液。
4.2.1 未受工业废水污染的生活污水：化学需氧量不大于300mg/L，总有机碳不大于100 mg/L。
4.2.2 含有城镇污水的河水或湖水。
4.2.3 污水处理厂的出水。
4.2.4 分析含有难降解物质的工业废水时，在其排污口下游适当处取水样作为废水的驯化接种液。也可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入少量生活污水，使适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量的絮状物时，表明微生物己繁殖，可用作接种液。一般驯化过程需3-8d。
4.3 盐溶液
4.3.1 磷酸盐缓冲溶液：将8.5g磷酸二氢钾（kH2PO4)、 21.8g磷酸氢二钾（K2HPO4)、 33.4g七水合磷酸氢二钠（Na2HPO4▪7H2O）和1.7 g氯化铵(NH4Cl)溶于水中，稀释至1 000 ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月。此溶液的pH值为7.2。
4.3.2 硫酸镁溶液，ρ(MgSO4)= 11.0g/L：将22.5 g七水合硫酸镁（MgSO4▪7H2O）溶于水中，稀释至1 000 ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
4.3.3 氯化钙溶液，ρ(CaCl2)=27.6 g/L：将27.6g无水氯化钙（CaCl2)溶于水中，稀释至1000 ml, 此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
4.3.4 氯化铁溶液，ρ (FeCl3）=0.15 g/L：将0.25 g六水合氯化铁（FeCI3▪6H2O）溶于水中，稀释至 1 000 ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。
4.4 稀释水：在5-20L的玻璃瓶中加入一定量的水，控制水温在(20±1)℃，用曝气装置(5.9)至少曝气1h，使稀释水中的溶解氧达到8mg/L以上。使用前每升水中加入上述四种盐溶液(4.3)各 1.0 ml,混匀，20℃保存。在曝气的过程中防止污染，特别是防止带入有机物、金属、氧化物或还原物。
稀释水中氧的质量浓度不能过饱和，使用前需开口放置1h，且应在24 h内使用。剩余的稀释水应弃去。
4.5 接种稀释水：根据接种液的来源不同，每升稀释水(4.4）中加入适量接种液(4.2)：城市生活污水和污水处理厂出水加1~10 ml，河水或湖水加10~100 ml，将接种稀释水存放在（20±1)℃的环境中，当天配制当天使用。接种的稀释水pH值为7.2, BOD5应小于1.5 mg/L。
4.6 盐酸溶液，c(HCl)=0.5 mol/L：将40 mL浓盐酸（HCI)溶于水中，稀释至1 000ml。4.7氢氧化钠溶液，C(NaOH)=0.5 mol/L：将20 g氢氧化钠溶于水中，稀释至1 000ml。
4.8 亚硫酸钠溶液，c(Na2SO3)=0.25 mol/L：将1.575 g亚硫酸钠（Na2SO3）溶于水中，稀释至1 000 ml。此溶液不稳定，需现用现配。
4.9 葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6，优级纯）和谷氨酸（HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH,优级纯）在130℃干燥lh，各称取150mg溶于水中，在1 000 ml容量瓶中稀释至标线。此溶液的BOD5 为（210±20) mg/L，现用现配。该溶液也可少量冷冻保存，融化后立刻使用。
4.10 丙烯基硫脉硝化抑制剂，ρ(C4H8N2S)=1.0 g/L：溶解0.20 g丙烯基硫脉(C4H8N2S)于200 ml水中混合，4℃保存，此溶液可稳定保存14d。
4.11 乙酸溶液，1+1。
4.12 碘化钾溶液，ρ (Kl)=100g/L：将10g碘化钾（KI）溶于水中，稀释至100ml。
4.13 淀粉溶液，ρ =5g/L：将0.50g淀粉溶于水中，稀释至100ml。
5 仪器和设备
本标准除非另有说明，分析时均使用符合国家A级标准的玻璃量器。本标准使用的玻璃仪器须清洁、 无毒性和可生化降解的物质。
5.1 滤膜：孔径为1.6μm。
5.2 溶解氧瓶：带水封装置，容积250~300 ml。
5.3 稀释容器：1000~2000 ml的量筒或容量瓶。
5.4 虹吸管：供分取水样或添加稀释水。
